Isolamento e caracterização da hemoglobina de Brachyplatystoma sp.: um bagre tropical

Isolamento e caracterização da hemoglobina de Brachyplatystoma sp.: um bagre tropical

Autores:

Joseph P. Martin,
Maurizio Brunori,
Robert L. Garlick,
Dennis A. Powers

ARTIGO ORIGINAL

Acta Amazonica

Print version ISSN 0044-5967On-line version ISSN 1809-4392

Acta Amaz. vol.8 no.4 supl.1 Manaus Dec. 1978

https://doi.org/10.1590/1809-43921978084s285

Resumo

O componente único da hemoglobina de Brachyplatysoma sp, tem um peso molecular aparente de 69000 determinado por filtração de gel. A hemoglobina apresenta efeito Bohr tanto ácido quanto básico, efeito de fosfato orgânico e não apresenta efeito Root. O P1/2, de oxigênio do sangue completo varia de 10.7 mm Hg em soluções equilibradas no ar até 25,1 mm Hg após a adição de 5,6% CO2 ao gás equilibrado. O efeito Bohr medido para hemoglobina "stripped" entre pH 7,0 e 8,0 é Δ log P1/2/Δp = H —0,23. Adições de 1mM ATP induzem mudança no efeito Bohr a Δ log P1/2/Δ pH = —0,58 na mesma faixa de pH. O valor n das soluções de hemoglobina "stripped" varia de 1 a pH 7,0. Adições de 1mM ATP mudam a variação de n a valores de pH mais altos causando um aumento no valor de n, n=2 a pH 7,4. As cinéticas da ligação de monóxido de carbono e dissociação de oxigênio são dependentes do pH. A taxa CO "on" vira autocatalítica à medida que o pH diminui, indicando interações positivas das subunidades. A taxa O2 "off" foi homogênea a todos os valores do pH. Os efeitos Bohr da hemoglobina de Brachyplatystoma e outras hemoglobinas de pimeloidídeos são maiores que as determinadas para as hemoglobinas não fraccionadas de espécies mais sedentárias de outras famílias de bagres, tais como Loricariidae e Callichthyidae.

Summary

The single hemoglobin component of Brachyplatystoma sp. has been isolated. The CO-hemoglobin has an apparent molecular weight of 69,000 as determined by gel filtration. The hemoglobin displays both acid and alkaline Bohr effects, an organic phosphate effect and no Boot effect. The whole blood p1/2 for oxygen shifts from 10.7 mm Hg in air equilibrated solutions to 25.1 mm Hg after the addition of 5.6% CO2to the equilibration gas. The p1/2 of purified hemoglobin varies from 0.3 mm Hg at pH 8.4 to 4.5 mm Hg at pH 5.9. The Bohr effect measured for stripped hemoglobin between pH 8.0 and 7.0 is Δ log p1/2/ΔpH = -0.23. Additions of 1 mM ATP induce a shift in the Bohr effect to Δ log p 1/2/ΔpH = -0,58 over the same pH range. The n value of stripped hemoglobin solutions varies from l at pH 5.9 to 1.7 at pH 7 0. Additions of 1 mM ATP shift the variation in n to higher pH values, and causes an increase in the n value, n = 2 at pH 7.4. The kinetics of carbon monoxide binding and oxygen dissociation are pH dependent. The COon rate becomes autocatylytic as the pH is lowered, indicating positive subunit interactions. The O2off rate was homogeneous at all pH values. The Bohr effects of Brachyplatystoma hemoglobin and other pimelodid hemoglobins are greater than those determined for the unfractionated hemoglobins of more sedentary species from other catfish families such as the Loricariidae and Callichthyldae.

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